操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及*濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

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中文名稱：Bafilomycin A1 (自噬抑制劑，質子泵抑制劑)

英文名稱：Bafilomycin A1

產品規格：100 μg

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

5989-81-1a-乳糖;純品型;標準品;有證書 規格： 0.25g

15121-94-5櫻草素 規格： HPLC≥98%;20mg

464-74-4蟾精 規格： HPLC≥98%;20mg

126223-28-7人參皂苷 Rg4 規格： HPLC≥98%;20mg

55395-07-8寶藿苷II；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A 規格： HPLC≥98%;5mg

156294-36-9Larotaxel 規格： HPLC≥98%;20mg

42294-03-1甘草酸單鉀鹽 規格： HPLC≥98%;20mg

83-79-4魚藤 規格： HPLC≥98%;20mg

35833-62-63-乙酸南美楝屬二醇酯 規格： HPLC≥98%;10mg

7374-79-0無梗五加苷B 規格： HPLC≥98%;20mg

a四氫姜黃素 規格： HPLC≥98%;20mg

174284-20-9芹菜素-7-0-（2G-鼠李糖）龍膽糖苷 規格： HPLC≥98%;20mg

Bafilomycin A1 (自噬抑制劑，質子泵抑制劑)小鼠巨噬細胞來源趨化因子(MDC)ELISA試劑盒 英文名： MDC ELISA Kit 5,5'-雙(4,4,5,5-四基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,2'-聯吩(>98.0%(T)) 5,5'-Bis(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-2,2'-bithiophene

小鼠髓樣分化因子88(MyD88)ELISA試劑盒 英文名： MyD88 ELISA Kit S-F-L-L-R S-F-L-L-R

SIPA1L2  信號誘導增相關蛋白1樣蛋白2抗體 規格: 0.2ml L-墨蝶呤 L-Sepiapterin

CK2  細胞角蛋白2抗體 規格: 0.1ml 次*(標準品) Hypaconitine

phospho-ATF2 (Thr53)  化活化復制因子2抗體 規格: 0.1ml 香葉（標準品） Geraniol

Rabbit Anti-Guinea pig IgG/FITC  FITC標記的兔抗豚鼠IgG 規格: 0.3ml 氟喹 Flumequine

CYP21  膽固21-羥化酶抗體 規格: 0.2ml 枸櫞米芬,克羅米芬 Clomiphene citrate

人β-1,3-半乳糖轉移酶1(β3GALT1)ELISA試劑盒 0.312-20 ng/mL TAE684 NVP-TAE684